在細(xì)胞生物學(xué)研究、藥物研發(fā)以及毒理學(xué)評(píng)價(jià)等領(lǐng)域，準(zhǔn)確評(píng)估細(xì)胞活力是探索細(xì)胞生理病理機(jī)制、篩選藥物活性成分、判斷化合物毒性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。CCK-8（Cell Counting Kit-8）細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒憑借其檢測(cè)原理、良好的性能優(yōu)勢(shì)及簡便的操作流程，成為科研工作者常用的細(xì)胞活力檢測(cè)工具。
一、檢測(cè)原理
CCK-8 細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒的核心原理基于線粒體中的脫氫酶活性。在活細(xì)胞內(nèi)，線粒體中的多種脫氫酶（如琥珀酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶等）能夠?qū)⑼庠葱缘乃苄运倪螓} WST-8（化學(xué)名稱：2-(2 - 甲氧基 - 4 - 硝基苯基)-3-(4 - 硝基苯基)-5-(2,4 - 二磺酸苯)-2H - 四唑單鈉鹽）還原為橙黃色的甲臜（formazan）產(chǎn)物 。細(xì)胞活力與線粒體脫氫酶活性密切相關(guān)，活細(xì)胞數(shù)量越多、代謝越旺盛，線粒體脫氫酶活性越高，催化還原產(chǎn)生的甲臜量也就越多。生成的甲臜可直接溶解于細(xì)胞培養(yǎng)基中，其在 450nm 波長處具有特征吸收峰，通過酶標(biāo)儀測(cè)定該波長下的吸光度值（OD 值），即可間接反映細(xì)胞數(shù)量與活力水平 。而死細(xì)胞由于線粒體功能受損，脫氫酶活性喪失，無法使 WST-8 發(fā)生還原反應(yīng)，不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生極少量甲臜。
二、產(chǎn)品性能優(yōu)勢(shì)
（一）高靈敏度與準(zhǔn)確性
CCK-8 試劑盒能夠檢測(cè)到低至幾十細(xì)胞的活力變化，對(duì)細(xì)胞數(shù)量的微小改變具有良好的響應(yīng)性。其檢測(cè)過程中，甲臜生成量與活細(xì)胞數(shù)量在較寬的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系 。例如，在細(xì)胞密度為 1×103 - 1×10?個(gè) /mL 的區(qū)間內(nèi)，吸光度值與細(xì)胞數(shù)量呈顯著線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)通常可達(dá) 0.98 以上，這使得科研人員能夠通過標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確推算樣本中的細(xì)胞活力與數(shù)量，為細(xì)胞增殖、凋亡等研究提供精確的數(shù)據(jù)支持 。與其他細(xì)胞活力檢測(cè)方法（如 MTT 法）相比，CCK-8 法生成的甲臜產(chǎn)物水溶性好，無需額外的溶解步驟，避免了因溶解導(dǎo)致的檢測(cè)誤差，進(jìn)一步提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
（二）操作簡便，節(jié)省時(shí)間
CCK-8 試劑盒的操作流程相對(duì)簡潔。實(shí)驗(yàn)時(shí)，只需向培養(yǎng)的細(xì)胞中直接加入適量的 CCK-8 試劑，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育 1 - 4 小時(shí)（根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)條件調(diào)整），即可直接使用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度 。無需像 MTT 法那樣，在反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行棄液、洗滌、溶解甲臜等繁瑣操作，極大地縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，提高了實(shí)驗(yàn)效率。對(duì)于大規(guī)模樣本檢測(cè)或高通量篩選實(shí)驗(yàn)，CCK-8 法的操作簡便性優(yōu)勢(shì)尤為明顯，能夠顯著減少實(shí)驗(yàn)人員的工作量。
（三）良好的細(xì)胞相容性與安全性
CCK-8 試劑中的 WST-8 是一種水溶性四唑鹽，對(duì)細(xì)胞的毒性較低，在常規(guī)檢測(cè)濃度下，短時(shí)間內(nèi)不會(huì)影響細(xì)胞的正常生理功能和代謝活動(dòng) 。在連續(xù)多天使用 CCK-8 試劑對(duì)細(xì)胞進(jìn)行活力檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞的生長曲線未出現(xiàn)明顯異常，表明該試劑不會(huì)對(duì)細(xì)胞的長期培養(yǎng)和后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生顯著干擾 。此外，與含有有機(jī)溶劑（如 DMSO）的 MTT 法相比，CCK-8 法無需使用有機(jī)溶劑溶解甲臜，減少了有機(jī)溶劑對(duì)細(xì)胞的潛在毒性作用和對(duì)實(shí)驗(yàn)人員健康的危害，同時(shí)也降低了實(shí)驗(yàn)操作過程中的安全風(fēng)險(xiǎn)。
（四）適用范圍廣
CCK-8 試劑盒適用于多種類型細(xì)胞的活力檢測(cè)，包括貼壁細(xì)胞（如 HeLa 細(xì)胞、HepG2 細(xì)胞）、懸浮細(xì)胞（如 Jurkat 細(xì)胞、K562 細(xì)胞） ，以及原代細(xì)胞（如原代神經(jīng)元細(xì)胞、原代肝細(xì)胞）。無論是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，還是昆蟲細(xì)胞等其他物種來源的細(xì)胞，均可采用該試劑盒進(jìn)行活力評(píng)估。在實(shí)驗(yàn)應(yīng)用方面，可用于細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，監(jiān)測(cè)細(xì)胞在不同培養(yǎng)條件或藥物處理下的生長情況；也可用于細(xì)胞毒性檢測(cè)，評(píng)估化學(xué)物質(zhì)、納米材料、病毒等對(duì)細(xì)胞活力的影響；還可用于細(xì)胞凋亡研究，判斷細(xì)胞在特定刺激下的死亡比例 。
三、實(shí)驗(yàn)操作流程與注意事項(xiàng)
（一）實(shí)驗(yàn)操作流程
細(xì)胞接種：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模瑢⑻幱趯?duì)數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化后，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，接種于 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔接種體積通常為 100 μL，細(xì)胞接種數(shù)量根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)要求確定，一般為 1×103 - 1×10?個(gè) / 孔 。將培養(yǎng)板置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中（37℃，5% CO?），培養(yǎng) 24 小時(shí)，使細(xì)胞貼壁或適應(yīng)懸浮培養(yǎng)環(huán)境。
藥物處理（如需）：若實(shí)驗(yàn)涉及藥物處理，在細(xì)胞培養(yǎng) 24 小時(shí)后，向各孔中加入不同濃度梯度的藥物溶液，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組（只加培養(yǎng)基）和陽性對(duì)照組（加入已知具有細(xì)胞毒性的藥物），每組設(shè)置 3 - 5 個(gè)復(fù)孔 。將培養(yǎng)板繼續(xù)置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育相應(yīng)時(shí)間（根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確定，一般為 24 - 72 小時(shí)）。
加入 CCK-8 試劑：孵育結(jié)束后，每孔加入 10 μL CCK-8 試劑，輕輕振蕩培養(yǎng)板，使試劑與培養(yǎng)基充分混勻 。將培養(yǎng)板放回細(xì)胞培養(yǎng)箱中，繼續(xù)孵育 1 - 4 小時(shí)。在此過程中，可每隔 1 小時(shí)觀察一次，當(dāng)甲臜顏色達(dá)到合適深度且吸光度值處于檢測(cè)線性范圍內(nèi)時(shí)，停止孵育。
吸光度測(cè)定：使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測(cè)定各孔的吸光度值（OD 值）。若樣本背景值較高，可同時(shí)測(cè)定 600 - 650nm 波長處的吸光度值，用 450nm 處的 OD 值減去 600 - 650nm 處的 OD 值，以消除背景干擾 。
（二）注意事項(xiàng)
細(xì)胞狀態(tài)把控：確保用于實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞處于良好的生長狀態(tài)，選擇對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行接種，避免使用老化或生長異常的細(xì)胞，否則會(huì)影響細(xì)胞活力檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性 。在細(xì)胞傳代過程中，嚴(yán)格控制傳代次數(shù)，一般建議在 10 代以內(nèi)使用。
試劑使用規(guī)范：CCK-8 試劑應(yīng)避光保存于 4℃冰箱中，使用前需平衡至室溫。避免試劑反復(fù)凍融，以免影響 WST-8 的活性 。使用時(shí)，盡量減少試劑在空氣中的暴露時(shí)間，防止被氧化。
孵育條件優(yōu)化：CCK-8 試劑的孵育時(shí)間會(huì)因細(xì)胞類型、細(xì)胞密度和代謝活性的不同而有所差異。對(duì)于代謝較慢的細(xì)胞，可能需要適當(dāng)延長孵育時(shí)間；而對(duì)于代謝旺盛的細(xì)胞，孵育時(shí)間可適當(dāng)縮短 。在進(jìn)行新的細(xì)胞系檢測(cè)或開展預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議設(shè)置不同的孵育時(shí)間梯度，確定最佳孵育時(shí)長。
避免干擾因素：實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)避免使用含酚紅的培養(yǎng)基，因?yàn)榉蛹t在 450nm 波長附近有吸收峰，會(huì)干擾甲臜的吸光度測(cè)定 。若必須使用含酚紅的培養(yǎng)基，需設(shè)置空白孔（只加培養(yǎng)基和 CCK-8 試劑）進(jìn)行對(duì)照，以扣除酚紅的影響。此外，一些具有還原性的化合物（如維生素 C、DTT 等）可能會(huì)與 WST-8 發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致吸光度值異常，在藥物處理實(shí)驗(yàn)中需注意藥物成分對(duì)檢測(cè)結(jié)果的潛在干擾。
CCK-8 細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒憑借其科學(xué)的檢測(cè)原理、突出的性能優(yōu)勢(shì)和便捷的操作流程，為細(xì)胞活力評(píng)估提供了可靠的解決方案。在生命科學(xué)研究與生物醫(yī)藥領(lǐng)域，合理運(yùn)用該試劑盒能夠幫助科研人員更準(zhǔn)確地獲取細(xì)胞活力數(shù)據(jù)，推動(dòng)相關(guān)研究的深入開展。
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